ツールバーのボタン（アイコン）とボタン（アイコン）の間の区切り線を作成するには

アイコンの上にカーソルをあてて、右クリックメニューの[スタートグループ]をクリックしてチェックを付けます。
選択したアイコンの左側に区切り線が表示されます。

再度[スタートグループ]をクリックしてチェックを外すと区切り線が消えます。